"Determinación de la persistencia e inactivación in vitro del ToBRFV a partir de inoculaciones en tabaco (Nicotiana tabacum L.)."
Artículo
Versión publicada
Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro
Saltillo, Coahuila, México.
"Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) es considerado un patógeno emergente, con alta persistencia en se
milla. Se han reportado técnicas de desinfección de herramientas, que reducen la aparición y la diseminación de
este patógeno en invernaderos. En este estudio se evaluaron dos ensayos, el primero consistió en determinar la
persistencia de ToBRFV in vitro a nivel invernadero. Se utilizaron plantas de tabaco var. Samsum como indicadoras
de lesiones locales necróticas (LLN), estas fueron establecidas en macetas de plástico de 1.5L. Se maceró tejido
crudo positivo a ToBRFV con inmunostrip® y DAS-ELISADO: 415nm a 1:10 (p/v) en H2
O destilada. La sabia infectiva
se mantuvo a temperatura ambiente. Se establecieron intervalos en progresión geométrica de 1, 4, 8 y 16 días.
Donde cada intervalo se consideró un tratamiento. También se evaluó sabia almacenada por 330 días a condicio
nes ambientales (20±23°C), preparada con H2
O. El segundo ensayo, para determinar la inactivación térmica de
ToBRFV, se probaron tres temperaturas: 70°C durante 20 min, 85 °C con 15 min y 30 min a 100rpm, se incubaron en
una IncumixTM. Como testigos se utilizaron: sin tratamiento térmico y sin virus. Los extractos crudos se derivaron
de 1g de tejido infectado a 1:10 (p/v) con una solución tampón de fosfatos (0.01M). Para cada ensayo, usamos 20
medias hojas desprendidas por tratamiento en la cual se inocularon 100µl de sabia en cada hoja. La inspección de
LLN se realizó 6 días posteriores a la inoculación (dpi). Los resultados mostraron que ToBRFV se mantiene latente
in vitro, capaz de sobrevivir en ausencia de tejido vegetal y producir infecciones locales en tabaco, como meca
nismo de resistencia. Por otro lado, ToBRFV se inactivó completamente a 85°C. Estos resultados demuestran que
la inactivación térmica puede ser aplicable para la desinfección de equipos y herramientas utilizados en labores
culturales de invernaderos."
Estudiantes
Investigadores