Obtención de una clona de A. rhizogenes con el vector ptdT-Defensina y su evaluación en la transformación de P. vulgaris

Abstract

"Los Péptidos Antimicrobianos (AMP's por sus siglas en inglés antimicrobial peptides) son moléculas de bajo peso molecular compuestas de 12 a 60 aminoácidos y se expresan de forma constitutiva o diferencial durante las etapas del desarrollo de los organismos. La principal función descrita de estos péptidos es la protección contra patógenos (bacterias, hongos, virus, etc.). En plantas los AMP´s participan en otros procesos independiente a la actividad antimicrobiana del péptido, ya que se han implicado en el ciclo celular, en la germinación de la semilla, el desarrollo de hojas, la floración y desarrollo del fruto. Existen diferentes familias de AMP's en plantas y a continuación de mencionan las principales: las defensinas, snakinas, las tioninas, las knottin, las hevein-like, las transportadoras de lípidos y los ciclotidos. Las defensinas son un tipo de AMP´s que se han descrito en diferentes plantas modelo, estos péptidos tienen un tamaño de 45 a 55 aminoácidos y cuenta con ocho residuos de cisteína y por lo tanto cuenta con cuatro posibles puentes disulfuro. Su estructura secundaria consta de una ? hélice y tres láminas ? antiparalelas. En un trabajo previo se analizó el transcriptoma de P. vulgaris en búsqueda de secuencias de las defensinas expresadas diferencialmente y se encontró una defensina expresada durante el proceso de nodulación. En el presente trabajo nos enfocamos en la selección de una clona de Agrobacterium rhizogenes(K599) que presentara una eficiencia de transformación mayor al 70%. Para esto se transformaron células calcio competentes de A. rhizogenes (K599) con la construcción de una defensina (ptdTPhvul.282400) realizada por (Garcia,2022). De las clonas transformadas con la construcción, se realizaron diferentes ensayos de transformación en plantas de frijol y se determinó que la clona denominada C5 fue la que presentó la mejor eficiencia de transformación. Los resultados de este trabajo permitirán el desarrollo de experimentos posteriores que permitan elucidar el papel de la defensina en el proceso de nodulación"