Construcción de un vector de expresión del gen CcV1 (de cotesia congregata bracovirus) para escherichia coli.

Abstract

"En el presente trabajo se llevó a cabo la construcción de un vector de expresión del gen CcV1, proveniente de un polidnavirus presente en Cotesia congregata, la cual parasita insectos de importancia económica por su papel como plaga en diversos cultivos agrícolas. Dicho proceso implicó el análisis in silico de las secuencias, tanto del gen como del vector de expresión pQE30, para desarrollar la mejor estrategia a seguir de manera experimental y así lograr obtener una construcción genética correcta; consistió en amplificar el gen mediante PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) con los cebadores específicos FCcV1; CACCATGTCGCTCGTCAAAAGTACG y RCcV1; CTAAGAAATTGATGAGAAATGAGTTTTAGATAGT (para el Forward y el Reverse, respectivamente; ambas secuencias están de 5’ a 3’), luego de extraer y purificar el vector pQE30 se digirió con la enzima HindIII y se ligó el gen en dicha secuencia linealizada. Posteriormente se tamizaron las clonas positivas mediante PCR usando combinaciones de los cebadores específicos para el gen, así como los diseñados para el vector (Fseq; AAGTGCCACCTGACGTCTAAG y Rseq; GCCAAGCTAGCTTGGATTCTCACC; para el Forward y el Reverse, respectivamente; ambas secuencias están de 5’ a 3’) dando como resultado una clona positiva (Clona #17) para la presencia del gen ligado al vector con la correcta orientación de la secuencia de ADN (Ácido Desoxirribonucleico); se corroboró así que la construcción proyectada se realizó satisfactoriamente. Finalmente, se criopreservaron las células que contienen la construcción pQE30-CcV1 para futuras investigaciones"