Efecto de una cistatina recombinante sobre enzimas digestivas de insectos que atacan a granos almacenados.

Abstract

"Otro rendimiento similar se reporto para la cistatina recombinante de mijo, en la cuales se obtuvieron rendimientos de 20mg/l, aunque la purificación fue a través de cromatografía de filtración en gel y HPLC (Kouzuma et al., 2000). Sin embargo, existen reportes contrastantes como en le caso de la cistatina del tallo de la piña, la cual fue clonada en vectores de expresión pET29 a y pET28, en la cual los rendimientos fueron de 3.7 mg/L y de 63.7 mg/L de cultivo, respectivamente. (Shyu et al., 2004). Se logró purificar la cistatina de amaranto a homogeneidad como lo demostró el perfil electroforético obtenido en geles de dos dimensiones, en el cual se detecto la presencia de una sola proteína, con punto isoeléctrico (pI) de 6.8. Esta caracterización ha sido poco reportada en trabajos similares, generalmente utilizan geles de poliacrilamida -SDS para corroborar su pureza. El punto isoeléctrico de la cistatina de amaranto es más o menos similar al reportado para la cistatina de Castanea sativa. Pernas et al., 1998. Sin embargo difiere considerablemente del reportado para Elianthus annus de 9.6. Kouzuma et al., 1996; siendo esta muy similar estructuralmente con la cistatina de amaranto. Esto sugiere diferentes características funcionales entre ambas proteínas. La purificación de la cistatina en grandes cantidades permitió evaluar su efecto sobre la actividad de enzimas digestivas de insectos. Las enzimas proteolíticas de los insectos utilizados en este trabajo se han caracterizado ampliamente, siendo principalmente del tipo de cisteín proteinasas (Gatehouse et al., 1985; Lemos et al., 1990; Wieman y Nielsen 1988). En este trabajo corroboramos la identidad de las proteinasas digestivas de los insectos utilizados, mediante la inhibición producida por el inhibidor E-64, especifico de cisteín proteinasas."