Obtención de una clona de rhizobium radiobacter para la transformación de plantas con el gen crv1

Abstract

"R. radiobacter es una bacteria que ha tenido un gran impacto la modificación genética de plantas, dado su mecanismo para realizar la transferencia de genes entre especies, por lo que se han buscado alternativas más viables, más rentables, más rápidas y con mejor eficiencia para realizar la integración de genes de interés. El presente trabajo se realizó mediante el método de congelación – descongelación para realizar la incorporación del vector pCAMBIA1301 – CrV1 en cepas quimiocompetentes de E. coli DH5α y posteriormente la transferencia de su DNA plasmídico a una cepa quiomiocompetente de R. radiobacter para obtener una clona que contenga el gen CrV1 y mediante el mecanismo que utiliza esta bacteria poder introducir este gen de interés en células indiferenciadas in vitro de cultivos de crucíferas. CrV1 es un gen inmunosupresor proveniente de un polydnavirus Cotesia rubecula que es un endoparasitoide que es control biológico del parasitoide Pieries rapae que ataca a cultivos de crucíferas. De la transformación de R. radiobacter se obtuvieron 32 cepas las cuales se les realizo su comprobación mediante PCR con cebadores específicos del fragmento de interés, así como con los cebadores específicos para pCAMBIA 1301, de estos productos se realizó una selección de las cuatro cepas más puras y se realizó una segunda comprobación por medio de PCR, donde se logró determinar el éxito de la transformación. Se obtuvo un resultado positivo con la amplificación del fragmento de interés con los cebadores específicos de este, así como una estabilidad en los controles negativos. Las cepas seleccionadas se crecieron en medio YEB con los antibióticos kanamicina y rifampicina para después pasar a su preservación en glicerol al 50% para su posterior uso"