Construcción de un vector con el gen ccv1 para modificación genética de plantas

Abstract

"Las avispas parasitarias son parásitos de otros insectos entre los que se encuentran los lepidópteros, a los cuales terminan por matar, puesto que se desarrollan de manera externa o internamente, estas avispas parasitarias trabajan en simbiosis con los polidnavirus (PDVs), virus que tienen un genoma de ADN circular polidisperso. Los polidnavirus son los responsables del éxito de la parasitación, ya que suprimen la respuesta inmune del huésped. Un ejemplo es el virus de Cotesia congregata, que parasita al lepidóptero Manduca sexta, el virus se encarga de suprimir la respuesta inmune de M. sexta lo que permite que C. congregata se desarrolle. En este trabajo se usó la proteína CcV1 del polidnavirus de C. congregata para clonarlo en el vector binario pCAMBIA1301, la metodología empleada fue mediante enzimas de restricción que nos permitió obtener el gen CcV1 y el vector pCAMBIA1301 con extremos compactibles y con la ayuda de la T4 DNA ligasa se clono el gen. El producto de la ligación se usó para transformar la cepa de E. coli Dh5?, para verificar la construcción se realizó PCR en colonia con cebadores específicos para el gen y el vector para confirmar las colonias positivas, para tener mayor certeza se seleccionaron tres muestras y se mandaron a secuenciar con cebadores que tuvieran cobertura del gen CcV1, las secuencias obtenidas se analizaron y nos permitió corroborar que el gen se encuentra entre promotor CAMV 35S y el terminador NOS y de esta manera podemos concluir que la construcción es la correcta a la esperada y puede usarse para la transformación mediada por Agrobacterium para obtener una planta transgénica"